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    如何提高磷酸鈣轉染的效率?

    發(fā)布時間: 2021-10-11  點擊次數(shù): 1511次

    提高磷酸鈣轉染法效率的共通步驟,目的都是為了避免產生會被細胞內吞、加工失效的大顆粒沉淀。


    提高轉染效率的操作有以下這些:

    1、將小分子DNA整合在高分子質量基因組DNA上,以大分子作為運載體,能提高轉染效率。


    2、測試緩沖液適合的ph,可制備幾批pH范圍為6.90~7.15的HEPES鹽緩沖液,分別測試緩沖效率,找到最適pH值。


    3、使用轉染促進劑,如甘油、氯喹、其他可購買的轉染促進劑。因為這些試劑對細胞有一定毒性,因此,應針對每種細胞系通過實驗確定轉染促進劑處理的最佳時機、時長和強度。


    除了這些共通的步驟,不同廠家還會對混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動,有些建議用移液器溫和吹吸混勻,有些則提倡應緩慢混合。


    因此,在使用磷酸鈣轉染時,應針對不同試劑和細胞系,耐心調整實驗參數(shù),才是獲得高轉染效率的關鍵。


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