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原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染操作指導(dǎo)

發(fā)布時間： 2022-09-08　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1239次

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染是外源基因進(jìn)入真核細(xì)胞的一種重要方法。這些外源DNA或RNA通過原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的包裝輔助才能順利進(jìn)入細(xì)胞，發(fā)揮相應(yīng)的作用，進(jìn)而研究其細(xì)胞功能及相應(yīng)的影響。廣泛用于基因功能研究、調(diào)控基因表達(dá)、癌癥、疾病模型相關(guān)研究和重組蛋白研究等生物學(xué)試驗(yàn)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性小，適合各種核酸分子或蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
　　目前原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染操作主要有三種方法：生物轉(zhuǎn)染，物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。
　　生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體，以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見，其侵染效率可以達(dá)到90%以上，但常因安全性等問題，很多實(shí)驗(yàn)室對其敬而遠(yuǎn)之。
　　物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因槍，無論哪一種都需要特定的設(shè)備，且性能好的設(shè)備價格也都很昂貴。
　　化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的轉(zhuǎn)染方法，主要包括陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學(xué)分子與帶有負(fù)電荷的核酸通過正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
　　一方面使復(fù)合體整體帶上正電荷（多數(shù)細(xì)胞膜表面帶有弱的負(fù)電荷，通過電荷作用吸引復(fù)合體到細(xì)胞膜表面）；
　　另一方面對線性的核酸進(jìn)行濃縮，使其體積變小更易穿透細(xì)胞膜。

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