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免疫細胞轉(zhuǎn)染實驗失敗了千萬不要慌！
發(fā)布時間： 2022-11-03 點擊次數(shù)： 1137次免疫細胞轉(zhuǎn)染在細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)中占據(jù)重要地位，廣泛用于基因與蛋白功能研究，成為實驗室工作中的常規(guī)技術(shù)手段之一。沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，需要根據(jù)細胞類型和實驗進行選擇。理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細胞毒性和對正常生理學(xué)的影響最小，并且易于使用和具有可重復(fù)性等特點。常用于哺乳動物細胞轉(zhuǎn)染的方法有磷酸鈣法、陽離子脂質(zhì)體法、病毒轉(zhuǎn)染法和電穿孔法。然而，免疫細胞轉(zhuǎn)染實驗出現(xiàn)失敗也不要驚訝，常見的異常結(jié)果是細胞大量死亡、轉(zhuǎn)染效率不高、重復(fù)實驗不穩(wěn)定。如何找到問題所在，讓實驗順利進行，就顯得比較重要。例如細胞轉(zhuǎn)染實驗失敗導(dǎo)致細胞大量死亡如何處理我們根據(jù)以下的分析來針對性解決：1.細胞狀態(tài)不佳：選擇生長旺盛的細胞進行轉(zhuǎn)染實驗。2.核酸純度不夠或內(nèi)毒素過高：采用高質(zhì)量核酸與去內(nèi)毒素的核酸。3.目的蛋白對細胞的毒性：嘗試進行再設(shè)計。4.轉(zhuǎn)染試劑過多：降低轉(zhuǎn)染試劑的量；轉(zhuǎn)染后4-6h換液。5.污染：排查污染源或重新復(fù)蘇細胞。6.抗生素存在：特別是陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進入細胞，降低細胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低，可降低抗生素濃度或不使用抗生素。7.營養(yǎng)不足：如果無血清條件下轉(zhuǎn)染的，要根據(jù)狀態(tài)及時補充營養(yǎng)。- 下一篇：DAPI染DNA的原理及使用方法
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