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    染料排斥法測(cè)定細(xì)胞生存力實(shí)驗(yàn)

    發(fā)布時(shí)間: 2022-12-13  點(diǎn)擊次數(shù): 1369次

    原理

    萘黑、臺(tái)盼藍(lán)以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透過(guò)活細(xì)胞。

    將細(xì)胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢査。

    材料與儀器

    胰蛋白酶
    巴斯德吸管 顯微鏡 手執(zhí)計(jì)數(shù)器 生存力染料 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

    步驟

    材料

    無(wú)菌

    受試細(xì)胞,如胰蛋白酶消化的貼壁細(xì)胞、融化冷凍的細(xì)胞或原代離散的細(xì)胞
    合適的生長(zhǎng)液 20ml
    0.25% 胰蛋白酶 5ml
    D-PBSA10ml

    非滅菌

    血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
    生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 臺(tái)盼藍(lán)或 1% 萘黑)
    巴斯德吸管
    顯微鏡
    手執(zhí)計(jì)數(shù)器

    操作步驟

    1. 用胰蛋白酶消化或離心與重懸,制備高濃度的細(xì)胞懸液(約1X106 個(gè)/ml)。

    2. 取一塊干凈的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,將蓋玻片間定在適當(dāng)位置上。

    3 . 將一滴細(xì)胞懸液和一滴(臺(tái)盼藍(lán))或四滴(萘黑)染料混勻。

    4 . 加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中。

    5 . 靜置1~2min (但不要放置很久,否則活細(xì)胞會(huì)受到損傷而吸收染料)。

    6 . 將計(jì)數(shù)板置于顯微鏡下,選擇10X 物鏡,利用網(wǎng)格線聚焦。
    7 . 計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)以及著色細(xì)胞數(shù)。

    8 .清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,放人盒內(nèi)。

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