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B 淋巴細胞膜表面免疫球蛋白的檢查

發(fā)布時間： 2023-04-12　　點擊次數(shù)： 1363次

原理
SmIg 是B 細胞的抗原識別受體，也是B 細胞特異的表面標志，用直接免疫熒光法可檢查出SmIg。用熒光素標記的抗Ig 抗體，在一定條件下與淋巴細胞混合，熒光素標記的抗Ig 抗體可以與B 細胞表面的Ig 結合，在熒光顯微鏡下觀察可見B 細胞膜上出現(xiàn)熒光。此方法可用來鑒定B 淋巴細胞。
材料與儀器
ICR 小鼠
異硫氰酸熒光素（FITC）標記的兔抗小鼠Ig 抗體 Hank's液
臺式離心機離心管吸管移液管
步驟
1. 采用頸椎脫臼法處死小鼠，解剖取出脾臟放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目鋼網(wǎng)研磨，混勻。從中吸取1 ml細胞懸液放入一試管中，加滿Hank's液，離心1000 rpm，10 分鐘，洗滌細胞一遍。傾去上清，沉積的細胞恢復1 ml容積，即為約1x107/ml的細胞懸液。另取一支試管，吸取1x107/ml的細胞懸液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即為1x106/ml的細胞懸液。
2. 取2 ml離心管兩只，各加入1x106 /ml的細胞懸液1 ml，用臺式離心機離心2000 rpm，3 分鐘，棄去上清液。一支加入熒光素標記的兔抗鼠Ig抗體100 ul，另一支不加抗體作對照，置4 ℃冰箱30 分鐘。
3. 取出離心管，用Hank's 液洗滌細胞兩次，以去除游離的抗體，最后一次離心后棄去上清液，留少許回流液，混勻，滴片，用熒光顯微鏡觀察。
注意事項
一、在滴片前要去除游離的抗體，以避免假陽性結果。

常見問題
實驗結果
熒光顯微鏡觀察，落射激發(fā)光下SmIg 陽性細胞可見環(huán)狀或斑點狀熒光。用鎢絲燈光源透射光照明計數(shù)同一視野內(nèi)淋巴細胞總數(shù)，共計數(shù)200～300 個淋巴細胞，算出其中SmIg 陽性細胞的百分數(shù)。

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