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    怎樣辨別是否細胞污染?

    發(fā)布時間: 2022-11-01  點擊次數(shù): 1198次

    培養(yǎng)細胞最擔心的就是細胞污染,這期繼續(xù)分享如何辨別細胞污染的經(jīng)驗。

     

     

    ★識別支原體污染

    這是一種很難發(fā)現(xiàn)卻經(jīng)常存在的問題。

    • 支原體是最小的(0.3 μm)能夠自我復制的有機體,倒置顯微鏡下通常觀察不到。

    • 支原體沒有細胞壁,對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的,可能直到出現(xiàn)了可以觀察到的病變或發(fā)現(xiàn)細胞正常功能喪失的時候,才意識到是發(fā)生了支原體感染。

    • 在沒有采用特殊的染色方法,也沒有觀察到病變的情況下,實驗總是不成功,就應懷疑被支原體污染。預防支原體污染的惟-途徑是經(jīng)常對細胞進行篩選。

       

     

    ★防止支原體感染

    • 只使用那些證明沒有污染支原體的血清和培養(yǎng)基。

    • 只接受那些保證沒有支原體感染的細胞。

     

    注意:當你怎么樣也得不到一種細胞表面蛋白的抗體,或不能有效地表達某種蛋白質時,可能是由于使用了被支原體感染的細胞。

     

     

     

     

     

    ★檢測支原體感染

    如果這株細胞對你十分重要,那么就應該每4~6周對細胞進行檢測,通常使用下面幾種方法:

    ●支原體的熒光染色是簡單、便宜也是常用的方法。

    ●使用支原體的特異引物進行PCR檢測。如果實驗室具備PCR儀和電泳條件,那么這種方法可能是尤為簡單的手段??梢宰约涸O計引物(設計好恰當?shù)膶φ眨?,也可以從公司購買引物。

    ●把細胞樣品送到能進行支原體檢測的公司檢測。這樣做雖不如自己檢測快(盡管托給公司比較容易,但會很貴),只有一個好處就算是不用自己親自動手。

     

    注意:如果你發(fā)現(xiàn)了支原體污染

    ●合適的方法是立即把細胞丟棄,從新復蘇。

    ●可以不理會它。

    ●可以采取某些挽救措施,但是會很困難,只適用于那些不可代替的細胞。簡單的方法是訂購除去支原體的試劑盒。

     

     

     

    ★交叉污染

    細胞還可能被別的細胞污染,這種交叉污染可能更廣泛,許多實驗人員在不經(jīng)意之間培養(yǎng)、使用和凍存了其他的細胞。

    如何避免交叉污染:

    ●只從有保障的地方得到細胞,或者自已檢查細胞。

    ●不要同時操作多株細胞。不要把多種培養(yǎng)瓶同時放在超凈臺內。

    ●不要使用同一個移液管操作多種細胞。

    ●不同細胞株不要使用同一瓶培養(yǎng)基或胰蛋白酶。

    ●操作后不要把移液管放回培養(yǎng)基的瓶中。

    ●培養(yǎng)維護時,使用栓塞式移液管。

     

    注意:

    如果你的細胞生長情況或功能突然發(fā)生了變化,在排除支原體污染后,檢查你的細胞是否發(fā)生了交叉污染(這些變化也可能是發(fā)生了突變或漂變)。

     

     

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